本发明公开了一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法，该方法为：首先在PCR反应体系中加入各反应组分与高保真Taq DNA polymerase，然后按如下反应程序进行PCR扩增：(1)95℃预变性2min；(2)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；28循环；(3)在反应的PCR管中直接加入普通Taq DNA聚合酶并混匀；(4)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；3循环；(5)72℃，10min。本发明在利用高保真Taq DNA polymerase进行PCR反应的最后3个循环中加入普通Taq DNA polymerase，PCR完成后即可获得具有高保真性的3'末端加“A”的PCR产物，克服了当前高保真PCR过程中无法在产物3'末端直接加“A”的问题，省略了以前需要对高保真PCR产物纯化后再用加“A”的过程，简化了高保真PCR产物TA克隆前的处理步骤。 |
