感染性疾病仍然是全球，尤其是发展中国家发病和死亡的主要原因之一，对感染性疾病的监测是有效预防和治疗的重要手段。如何能够方便、快捷、准确地对疑似感染标本进行即时分析、快速得到检验结果，是生物分子检测领域的一个重大发展方向，即床旁/即时检测（Point-of-care testing, POCT）。 环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）是2000年由Notomi等首先提出的一种体外等温扩增特异性核酸片段的技术，具有反应全过程恒温、反应时间短 、产物量大、特异性高、易于检测等优势。 免疫层析试纸条又称为横向流动装置(Lateral flow device，LFD)，是一种基于试纸条的色谱检测方法，主要通过试纸条上的抗原抗体或配体与特异性扩增产物上的标记物相互作用实现，通过对照线和检测线的有无来判断分析物是否存在，近年被广泛用于核酸扩增产物的快速现场可视化检测。 将LAMP技术与LFD相结合，既无需昂贵复杂的核酸扩增仪器，又能使检测结果可视化，是能够实现临床POCT检测的。 在本课题组前期研究中，我们已经完成了基于探针的单管双重LAMP反应，成功建立了检测HPV16及HPV18的双重LAMP反应体系，其特异性及灵敏度甚至优于目前临床实验室使用的RT-PCR方法。再者，我们利用UDG酶（Uracil-DNA-glycosylase，UDG）有效地消除产物气溶胶导致的假阳性扩增，也完成了HPV16及HPV18的单重LFD检测。 现阶段我们旨在建立一种集无需核酸纯化的标本前处理、单管多重LAMP反应及LFD多重产物检测的整合体系。并且，我们已针对解脲脲原体( Ureaplasma urealyticum，UU )和人型支原( Mycoplasma hominis，MH)设计并完成了多重LAMP-LFD检测。 |
